近幾十年來，腫瘤免疫治療顯示出巨大的抗癌潛力，免疫系統(tǒng)被激活以靶向惡性腫瘤。腫瘤免疫治療的臨床結(jié)果取決于腫瘤特異性抗原的存在，這是基于T淋巴細(xì)胞腫瘤免疫治療的核心。

新抗原是一種來源于非同義突變的腫瘤特異性抗原，是腫瘤免疫治療的非常有吸引力的靶點(diǎn)。識(shí)別相關(guān)腫瘤特異性抗原及其同源TCRs是基于新抗原靶向治療的重要基礎(chǔ)。為此，體外擴(kuò)增的自體TILs和／或外周血淋巴細(xì)胞（PBL）通常用于腫瘤抗原發(fā)現(xiàn)。然而，PBL和TIL中新抗原特異性T細(xì)胞的頻率通常較低，此外，盡管有開創(chuàng)性的工作改善了血液中新抗原反應(yīng)性的檢測(cè)，但PBL中的抗原發(fā)現(xiàn)仍然具有挑戰(zhàn)性。

NeoScreen，是一種體外TIL擴(kuò)增和篩選方法，旨在優(yōu)化抗原驗(yàn)證的敏感性，并分離罕見的腫瘤抗原特異性CD8＋ T細(xì)胞，用于從高度富集的腫瘤抗原特異性CD8＋T細(xì)胞克隆同源TCR。與僅依賴于IL－2的傳統(tǒng)培養(yǎng)方法不同，NeoScreen是基于將TIL早期暴露于裝載腫瘤特異性抗原的自體抗原呈遞細(xì)胞（APC）。

研究選擇了CD40活化的B細(xì)胞作為APC，因?yàn)橄鄬?duì)于樹突狀細(xì)胞，它們很容易從少量血液中獲得和擴(kuò)增，并且很容易通過電穿孔進(jìn)行工程化。此外，為了優(yōu)化APC效價(jià)，通過電穿孔R(shí)NA表達(dá)免疫刺激性4－1BB配體（4－1BBL）、OX40配體（OX40L）和IL－12。

通過在七名患者中測(cè)試NeoScreen顯示新腫瘤抗原的能力，研究發(fā)現(xiàn)，NeoScreen能夠識(shí)別7名患者中的19個(gè)腫瘤表位。在19個(gè)表位中，有9個(gè)表位的特異性TIL在NeoScreen中的出現(xiàn)頻率明顯高于常規(guī)培養(yǎng)，而對(duì)于19個(gè)表位中的10個(gè)表位，腫瘤抗原特異性TIL僅在NeoScreenTIL中發(fā)現(xiàn)。總的來說，與使用傳統(tǒng)策略每位患者識(shí)別1個(gè)表位相比，使用NeoScreen的患者平均識(shí)別三個(gè)腫瘤表位。

NeoScreen除了可以敏感識(shí)別腫瘤新抗原外，它還能夠敏感地分離針對(duì)腫瘤抗原的相關(guān)TCR。使用pMHC復(fù)合物或4－1BB上調(diào)純化腫瘤抗原特異性新篩選TIL，并對(duì)分離的T細(xì)胞進(jìn)行TCRα和TCRβ批量測(cè)序。通過追蹤原始腫瘤和NeoScreen擴(kuò)增TIL中經(jīng)驗(yàn)證的TCRβ序列，確定NeoScreen過程確實(shí)導(dǎo)致腫瘤抗原特異性TIL的顯著擴(kuò)增。如代表性PHLPP2N1186Y特異性TCR所示，所有三種TCR均在原始腫瘤中檢測(cè)到，并且它們各自的頻率在NeoScreen擴(kuò)增TIL中顯著增加。

50個(gè)克隆的累積數(shù)據(jù)證實(shí)了NeoScreen識(shí)別新抗原或TAA特異性新TCR的潛力，這些新抗原或TAA在傳統(tǒng)TIL中未檢測(cè)到�？偟膩碚f，與傳統(tǒng)TIL相比，NeoScreen的 TIL中腫瘤抗原特異性TCR顯著富集了幾個(gè)數(shù)量級(jí)。

最后，在人類IL－2轉(zhuǎn)基因NOG小鼠模型中使用患者來源的異種移植腫瘤，驗(yàn)證了NeoScreen識(shí)別的TCR是否可用于基于TCR的個(gè)性化過繼性細(xì)胞療法（ACT）。結(jié)果顯示，與過繼轉(zhuǎn)移的常規(guī)外周血T細(xì)胞相比，從NeoScreen TIL克隆的腫瘤抗原特異性TCR－T細(xì)胞，特異性地抑制了腫瘤生長。這支持了使用NeoScreen進(jìn)行TCR－T細(xì)胞治療的可行性。

總的來說，NeoScreen，這是一種能夠?qū)δ[瘤新抗原進(jìn)行高度敏感篩查的方法，并產(chǎn)生了可能比目前更廣泛的腫瘤抗原反應(yīng)性TCR。NeoScreen能夠高效識(shí)別黑色素瘤以及卵巢癌、結(jié)直腸癌和肺癌中的腫瘤特異性抗原，并且能夠高度敏感地分離同源腫瘤反應(yīng)性TCR。因此，NeoScreen代表了一種有價(jià)值的手段，可以為癌癥疫苗選擇相關(guān)的個(gè)性化靶抗原，并且分離出腫瘤反應(yīng)性TCR，用于實(shí)體瘤的個(gè)性化TCR－T細(xì)胞治療。

       原文標(biāo)題 : NeoScreen：一種敏感識(shí)別新抗原和同源TCR的新方法